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本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。本产品采用新型的吸附材料，高效、专一吸附DNA。本产品适用于提取1～5mL过夜培养的菌液，操作过程快速、方便，无需苯酚抽提、乙醇沉淀等步骤，整个提取过程可在20分钟内完成。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染等各种常规实验。

• 本试剂盒于常温(15～25℃)运输，室温(15～25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2～8℃。
  
• 温度较低时，有的溶液可能产生沉淀，使用前在37℃水浴中加热，直至沉淀消失。
  
• 第一次使用前将RNase A加入Buffer I中，混匀后置于2～8℃保存，有效期为半年。
  
• RNase A在室温可稳定保存6个月以上，长期保存需存放于-20℃。

• 接种目标菌株于含合适抗生素的培养基中，37℃摇床振荡培养12-16h。
  
• 取1～5mL过夜培养的菌液，加入离心管中，室温12000rpm离心1min，尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。
  
• 在菌体沉淀中加入250μL Buffer I(请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。
  注意：一定要彻底悬浮菌体，否则会影响裂解，导致得率和纯度偏低。
  
• 加入250μL Buffer II，立即温和颠倒离心管6～8次，使菌体充分裂解。
  注意：温和混合，不可剧烈震荡，以免打断基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5min，以免质粒受到破坏。如果菌液未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
  
• 加入350μL Buffer III，立即温和颠倒离心管6～8次，充分混匀，此时将出现白色絮状沉淀。
  注意：Buffer III加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。
  
• 室温12000rpm离心10min，将上清液全部小心移入吸附柱P1中(吸附柱放入收集管中)，注意尽量不要吸出沉淀。室温12000rpm离心30 s，倒掉收集管中的液体，将吸附柱P1放入收集管中。
  注意：吸附柱的最大有效容积为750μL，如果裂解液较多，可多次加入裂解液，直至全部流过吸附柱。
  
• (可选步骤)向吸附柱P1中加入500μL Buffer DW，室温12000rpm离心30 s，倒掉收集管中的液体，将吸附柱P1重新放回收集管中。
  对于宿主菌是end A+宿主菌(TG1，BL21，HB101，JM系列，ET12567等)，这些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解质粒DNA，推荐采用此步。
  对于宿主菌是end A-宿主菌(DH5α，TOP10等)，此步可省略。
  
• 向吸附柱P1中加入600μL Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，室温12000rpm离心30 s，倒掉收集管中的液体，将吸附柱P1放入收集管中。
  注意：Buffer PW(50T)中加入60mL无水乙醇。Buffer PW(200T)中加入120mL无水乙醇。
  
• 重复步骤8一次。
  
• 将吸附柱P1放入收集管中，室温12000rpm离心1min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
  注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续酶反应实验。为确保下游实验免受影响，建议将吸附柱P1开盖，于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  
• 将吸附柱P1置于一个干净的离心管中，向吸附膜中央加入50～100μL Buffer EB，室温静置2min，12000rpm离心1min，将质粒溶液收集到离心管中，-20℃保存或用于后续试验。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于50μL，体积过小影响回收效率。
  洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0～8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在20℃，以防止DNA降解。
  为了增加质粒的回收率，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，室温静置2min，12000rpm离心1min，将质粒溶液收集到离心管中。